肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥?(HIT)?是一種免疫介導(dǎo)的嚴(yán)重藥物不良反應(yīng)，其特征是抗體識(shí)別血小板因子 4/肝素復(fù)合物?(PF4/H)?并激活血小板，導(dǎo)致促血栓形成狀態(tài)。雖然部分接受肝素治療的患者會(huì)產(chǎn)生 PF4/H 抗體，但只有一部分患者會(huì)產(chǎn)生血小板激活抗體并導(dǎo)致HIT。臨床研究已證明血小板激活抗體與 HIT 之間存在密切相關(guān)性，但血小板激活抗體（致病性抗體）和非激活抗體（非致病性抗體）的分子差異尚不清楚。

　　近日，Versiti血液研究所，威斯康星醫(yī)學(xué)院在Blood發(fā)表了題為Cloned antibodies from patients with heparin-induced thrombocytopenia (HIT) provide new clues to HIT pathogenesis的研究論文，通過(guò)克隆和研究HIT病人血小板激活抗體和非激活抗體，闡述了抗體導(dǎo)致HIT的分子機(jī)制，并為HIT的診斷和治療提供了新的思路。

　　肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥?(HIT)?是一種免疫介導(dǎo)的嚴(yán)重藥物不良反應(yīng)，通常發(fā)生在肝素治療 3-6 天后。相當(dāng)多的HIT患者經(jīng)歷嚴(yán)重的動(dòng)脈和/或靜脈血栓形成和血栓栓塞。肝素誘發(fā)的抗體識(shí)別血小板因子 4/肝素復(fù)合物?(PF4/H)?并激活血小板藏靈骨泰品質(zhì)保證，造成血小板減少以及血栓形成。。這些抗體主要是多克隆免疫球蛋白G1?(IgG1)，其與PF4和肝素形成的IgG/PF4/肝素免疫復(fù)合物是 HIT 發(fā)病機(jī)制的核心。這些免疫復(fù)合物結(jié)合血小板表面的 FcgRIIa 并誘導(dǎo)血小板活化，導(dǎo)致血小板減少和血栓形成。雖然部分接受肝素治療的患者會(huì)產(chǎn)生 PF4/H 抗體，但只有其中一部分患者會(huì)產(chǎn)生血小板激活抗體。臨床研究已證明血小板激活抗體與 HIT 藏靈骨泰 的發(fā)生存在密切相關(guān)性，但血小板激活抗體（致病性）和非激活抗體（非致病性）在分子水平上如何相互不同尚不清楚。為了闡述這個(gè)問(wèn)題，作者從6名 HIT 患者中克隆了1986個(gè)IgG1 抗體，通過(guò)ELISA和PEA 實(shí)驗(yàn)的篩選，54個(gè)抗體可以識(shí)別PH4/H，其中7個(gè)為血小板激活?(PA)?抗體， 47 個(gè)為非激活(NA)?抗體。通過(guò)研究這54個(gè)抗體的結(jié)構(gòu)和功能特性， 作者發(fā)現(xiàn)：

　　1. PA 抗體優(yōu)先使用 JH6?(p=0.002)?和 VH3/JH6 組合?(p=0.0003)；

　　2. PA 和 NA 抗體 都使用 κ 鏈，而 NB 抗體的 κ 鏈?zhǔn)褂寐蕿?61%?(p

　　3. 在 PA 抗體的 κ 鏈互補(bǔ)決定區(qū)?(LCDR3)?區(qū)別于NA 和 NB 抗體的特點(diǎn)；

　　4. PA 抗體 的重鏈 CDR3?(HCDR3)?比 NA?(p

　　5. 與 NA?(p=0.058)?或 NB?(p=0.002)?抗體相比，PA 抗體HCDR3含有更多帶正電荷的氨基酸殘基；

　　6. 與 NA?(p=0.067)?或 NB?(p

　　7. 更重要的是：7 個(gè) PA 抗體中的 5 個(gè) HCDR3 包含 RX1-2K/RX1-2R/H模序（RKH模序），其余 2 個(gè) PA 抗體 HCDR3 包含一個(gè)至少 5 個(gè)連續(xù)酪氨酸的模序（Y5 模序）。然而，NA 和 NB 克隆抗體均不含 RKH 藏靈骨泰功效 和 Y5 模序。對(duì)PA 克隆抗體中RKH或者Y5模序的保守氨基酸的替換都會(huì)降低或消除它們的血小板激活能力。另外，替換 NA 克隆抗體的 HCDR3 中的適當(dāng)氨基酸可把它們轉(zhuǎn)化成為PA抗體；

　　8. B 細(xì)胞受體庫(kù)大規(guī)模測(cè)序顯示，HIT 患者外周血 IgG+ B 細(xì)胞受體含有 RKH 或 Y5 模序的頻率顯著高于獲得肝素治療但并未發(fā)展 HIT 的患者，這表明 HIT 患者中具有 RKH 或 Y5 模序B 細(xì)胞受體的 B 細(xì)胞擴(kuò)增。

　　這些發(fā)現(xiàn)表明具有 RKH 或 Y5 模序的抗體與 HIT 發(fā)病機(jī)制相關(guān)，并為未來(lái)診斷和治療該病癥提供新方法。

　　總之，從 藏靈骨泰正品旗艦店 HIT 患者中克隆 PF4/H 特異性抗體、并探索這些克隆抗體的功能和分子特性。結(jié)果首次發(fā)現(xiàn)HIT 致病抗體的結(jié)構(gòu)特征，這些特征與其PF4/H 復(fù)合物的結(jié)合能力相關(guān)，重鏈互補(bǔ)決定區(qū) 3 (HCDR3) 中的特定模序可將血小板激活（致病性）的抗體與非激活性（為非致病性）的PF4/H 特異性區(qū)分開(kāi)來(lái)。這些研究成果進(jìn)一步加深對(duì)HIT 發(fā)病機(jī)制理解，并有望推動(dòng)HIT疾病診斷和治療的新方法。

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